Efecto de la Leishmania mexicana, RANTES y TNF alfa en el fenotipo y propiedades migratorias in vitro de células dendríticas esplénicas de ratones BALB/c neonatos y adultos / Dendritic cells of BALB/c mice: phenotypic characteristics and migratory properties

Las células dendríticas (CDs) son esenciales en el desarrollo y regulación la respuesta inmunitaria (RI). Existen controversias en cuanto al potencial de inducción de la RI por las CDs en el período neonatal. Se ha propuesto que la RI específica de un neonato depende de la relación cuantitativa CD/linfocito T, y del momento, etapa neonatal o adulta, del encuentro con el antígeno, lo que parece influir sobre las propiedades fenotípicas y biológicas de las CDs, modificando su comportamiento. Por tal motivo, nos planteamos evaluar el efecto de un antígeno, Leishmania mexicana (L. mexicana) y de las citoquinas TNFa y RANTES sobre las características fenotípicas y propiedades migratorias, in vitro, de las CDs esplénicas provenientes de ratones BALB/c neonatos y adultos, usando citometría de flujo y la cámara de Boyden. Las CDs de ratones neonatos y adultos, en condiciones basales, expresan de manera similar, las moléculas CD40, CD86, CMHII y CD54. Este mismo fenómeno se observó al incubar dichas células con el Ag (L. mexicana) a excepción de la molécula CD40 cuya intensidad de expresión se elevó significativamente (P<0,05) en ambos grupos de estudio. El índice de migración de las CDs en presencia de medio de cultivo condicionado de L. mexicana, RANTES y TNFa fue mayor en adultos que en neonatos. Estos resultados muestran que las CDs neonatales son fenotípicamente similares a las adultas. Ante los mismos estímulos se comportan de manera diferente, sugiriendo la existencia de otros factores, que pudieran explicar la mayor susceptibilidad a infecciones en la etapa neonatal.

Dendritic cells (DCs) are essential in the development and regulation of the immune response (IR). The inherent potential of DCs to induce a specific immune response in the neonatal period is controversial. It has been suggested that the specific IR in neonates depends on the quantitative relation of DC/T lymphocytes, as well as on the neonatal or adult age at which the interaction antigen/DC/T lymphocytes occurs. This suggests that this contact has an influence on the phenotypic and/or biological properties of DCs, which modifies its behavior. Therefore, the effects of Leishmania mexicana (L. mexicana) and of TNFa and RANTES cytokines on immunophenotypical characteristics were evaluated on spleen DCs, from neonate and adult BALB/c mice, by using flow cytometry and in vitro migratory properties with a Boyden Chamber. In basal conditions, neonate and adult DCs express the same molecules (CD40, CD86, MHCII and CD54). When the DCs interact with the antigen L. mexicana, the expression of these molecules are similar in adults and in neonates, with the exception of CD40 whose intensity of expression was raised (P<0,05) in both groups. The rate of migration of the DCs in a culture medium conditioned of L. mexicana, RANTES and TNFa was higher in adults than in newborn mice. These observations suggest that neonatal and adult mice DCs have similar phenotypic characteristics. Under the effect of the same stimulus they respond differently; suggesting that other factors are involved in the higher susceptibility that newborns have to infections.

Investigação sobre o papel dos antígenos parasitários na patogenia da miocardite crônica, em camundongos infectados pelo Trypanosoma cruzi: a importância das células dendríticas intersticiais do miocárdio / Research on the role of parasitic antigens in pathogenesis of chronic myocarditis in mice infected with Trypanosoma cruzi: the importance of dendritic cells myocardial interstitial

A doença de Chagas, evolui em diferentes fases: aguda, com sintomas gerais e comprometimento cardíaco devido ao parasitismo pelo T. cruzi, das miocélulas cardíacas e sua rotura o que determina intensa miocardite, pela presença dos parasitos e por mecanismos imunes. Após a fase aguda, os pacientes passam a uma forma indeterminada com escassos parasitos e lesões miocárdicas focais e discretas. Os pacientes na forma indeterminada, em 40% dos casos, evoluem para uma forma crônica cardíaca. Nesta forma, os parasitos são raros nas miocélulas cardíacas, porém uma miocardite crônica difusa e fibrosante se instala, evoluindo para a insuficiência cardíaca e o óbito. A patogenia das lesões cardíacas é controvertida, sendo atribuída ao parasito o papel de estimular a resposta imune ou a um mecanismo de autoimunidade. No presente trabalho, utilizando-se o modelo do camundongo, procura-se investigar o papel dos antígenos parasitários na manutenção das lesões da fase crônica da infecção pelo T. cruzi, pela pesquisa de parasitos e de antígenos parasitários em focos inflamatórios ou pela demonstração de antígenos seqüestrados e expressos na membrana de células dendríticas intersticiais do miocárdio (CDls), pela marcação in situ, por métodos imunohistoquimicos, utilizando anticorpo anti-T.cruzi. Em camundongos cronicamente infectados, tratados com quimioterápico específico, as lesões histopatológicas regridem, permanecendo, entretanto um processo inflamatório residual. Foi desenvolvida uma investigação, com o objetivo de esclarecer, em camundongos cronicamente infectados, tratados e não tratados com o Benzonidazol, a presença de parasitos ou de seus antígenos, em focos de destruição de miocélulas parasitadas ou capturadas por CDls, e a sua relação com a persistência de infiltrados inflamatórios residuais no coração. Foram utilizados camundongos Suíços infectados com a cepa Colombiana (resistentes ao Benzonidazol) ou com um clone da 21SF (susceptível) tratados na fase crônica a partir de 90 e 120 dias de infecção durante 90 dias. O inóculo para ambos os Grupos experimentais foi de 104 formas saguícolas do T. cruzi por via intraperitoneal. Os camundongos tratados foram sacrificados 150 ou 200 dias após o tratamento, juntamente com os controles não tratados. Foram realizados os testes de cura parasitemia, subinoculação em camundongos recém-nascidos, (hemocultura, sorologia). Secções de coração e de músculo esquelético foram fixadas e processadas para estudo histopatológico em secções coradas pela Hematoxilina e Eosina ou pelo método do Picro-Sirius para colágeno e para imunohistoquímica com anticorpos anti-T. cruzi e anti-MAC. Os resultados mostraram na infecção crônica pela cepa Colombiana lesões inflamatórias, moderadas a intensas, com necrose de miocélulas cardíacas e infiltrados mononucleares e fibrose intersticial difusa e focal. Nos tratados, houve regressão parcial das lesões permanecendo infiltrados inflamatórios residuais que variaram de discretos a moderadas e sinais de regressão da fibrose. Na infecção crônica pelo clone 21SF C3 havia miocardite crônica difusa discreta ou moderada na maioria dos casos. Nos tratados, houve decréscimo das lesões inflamatórias, com sinais de regressão da fibrose. Testes imunohistoquimicos com anticorpos anti- T.cruzi revelaram detritos parasitários positivos em focos inflamatórios. As CDls do miocárdio apresentaram em todos os casos, marcação positiva para antígeno do T. cruzi, comprovando o papel das células apresentadoras de antígenos na manutenção das lesões na fase crônica da infecção.

Immune response to Leishmania infection.

Antileishmanial immune response is shown to be host genotype dependent so that some inbred strains of mouse are susceptible while others are resistant. The resistance is conferred by T-helper type-1 (Th1) cells while the susceptibility is conferred by Th2 cells. Th1 cells secrete IL-2 and IFN-gamma but Th2 cells secrete IL-4, IL-5 and IL-10. It has been shown that IFN-gamma activates macrophages to express iNOS2, the enzyme catalyzing the formation of nitric oxide. Nitric oxide kills the intracellular amastigotes. In contrast, Th2 immune response limits the action of Th1 functions via IL-10 and IL-4, which deactivate macrophages helping intracellular parasite growth and disease progression. Being a parasite, Leishmania ensures its own survival by modulating host immune system either by inducing immunosuppression or by promoting pro-parasitic host functions. A detailed knowledge of this host-parasite interaction would help in designing prophylactic and therapeutic strategies against this infection.

Las celulas dendriticas y su interaccion con los parasitos de Leishmania / Dendritic cells and its interaction with Leishmania parasites

Objetivo: recopilar evidencias sobre el papel de las células dendríticas durante el proceso de infección y la respuesta inmune frente a Leishmania spp. Fuente de los datos: se empleó la base de datos Pubmed (1989-2003) cruzando las palabras claves "células dendríticas" y "Leishmania" y artículos recopilados por los autores. Selección del estudio: se analizaron 120 artículos; se seleccionaron 29 que sobre la biología de las células dendríticas y 28 que muestran evidencias del efecto de la interacción de las células dendríticas con los parásitos de Leishmania spp. Extracción de los datos: los artículos se clasificaron de acuerdo con la metodología empleada para obtención de las células dendríticas, la especie de parásito y el efecto de la infección en el fenotipo y función de las células dendríticas. Síntesis de los datos: las células dendríticas son células especializadas en la toma, procesamiento y presentación de antígenos y por lo tanto participan en la iniciación de la respuesta inmune primaria luego de la infección, dada su capacidad de estimular células T no sensibilizadas. Durante la infección por Leishmania se regulan procesos de la célula dendrítica tales como expresión de moléculas de membrana, activación, maduración, migración, producción de citoquinas y presentación antigénica. Conclusión: las células dendríticas participan en la iniciación y regulación de la respuesta mediada por células T durante la infección por Leishmania spp. Sin embargo, el efecto de la infección en la activación y función de la célula dendrítica permanece aun por definirse.